逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）使用說明

反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase,也可寫成逆轉(zhuǎn)錄酶) 又稱為依賴RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中發(fā)現(xiàn)了一種特殊的DNA 聚合酶，該酶以RNA 為模板，以dNTP 為底物，tRNA( 主要是色氨酸t(yī)RNA) 為引物，在tRNA 3'-OH 末端上，根據(jù)堿基配對的原則，按5'-3'方向合成一條與RNA 模板互補的DNA 單鏈，這條DNA 單鏈叫做互補DNA (complementary DNA，CDNA)。

反轉(zhuǎn)錄酶（Reverse transcriptase）是以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。

AMV是一種逆轉(zhuǎn)錄酶的名稱。amv逆轉(zhuǎn)錄酶分離自禽類成髓細胞瘤病毒，其方法由houts等人的方法改進而來。分離得到的酶是分子量為157kd的αβ全酶。amv逆轉(zhuǎn)錄酶經(jīng)高度純化，*無核酸酶污染。amv逆轉(zhuǎn)錄酶可用于cdna合成，也可用于rna和dna的雙脫氧測序。amv逆轉(zhuǎn)錄酶以總rnd或polya+rnd為模板，具有以rna為模板的dna聚合酶活性，dna為模板的dna聚合酶活性和rnaseh酶活性，

AMV逆轉(zhuǎn)錄酶

適反應(yīng)溫度在42-55℃，高可達60℃，如果使用焦磷酸鈉，適溫度為37-41℃。rtt反應(yīng)緩沖液根據(jù)不同用途可以作為5x或10x反應(yīng)液使用，同時可抑制rnaseh酶活性。按照標準使用方法可以得到長至10-12kbcdna。rt007amv逆轉(zhuǎn)錄酶比普通amv逆轉(zhuǎn)錄酶和mmlv逆轉(zhuǎn)錄酶能耐受更高的溫度和合成更長的cdna。

基本資料

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反應(yīng)溫度：42-60℃產(chǎn)物長度：10-12kb

來源：禽畜源，全酶

反應(yīng)效率：5u/reaction

rnaseh活性：弱，被抑制

特點

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1．高靈敏度2、高得率

3．高達60℃的反應(yīng)溫度可有效打開rna二級結(jié)構(gòu)

4．可合成長至10-12kb的cdna

5．rt反應(yīng)液可適用不同用途

逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）使用方法

solarbio逆轉(zhuǎn)錄酶

貨號：RT1060
規(guī)格：200U/500U/1000U
保存:-20℃保存，避免反復凍融，保質(zhì)期為2年。
產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品簡介：
逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）從AvianMyeloblastosisVirus分離出來，經(jīng)過高度純化，不含核酸酶。可用于合成一鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉(zhuǎn)錄、測序和RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）一個活性單位U定義為：在37℃，10min條件下，使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質(zhì)所需的酶量。

使用說明：
合成一鏈cDNA的步驟
以下試劑客戶自己提供
dNTPs(10mM)

引物（OligodT（18）或隨機引物或特異性引物

無核酸酶雙蒸水
RNA模板
RNase抑制劑

RT反應(yīng)（20μl體系）：
1．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
2．取滅過菌且無核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

2~5μgRNAXμl
引物*1μl

引物*：OligodT18(10μM)或隨機引物(50ng/μl)或特異性引物(2μM)】
dNTPs(10mM)1μl
補加無核酸酶的雙蒸水至總體積15.5μl

3. 65度保溫 5min 然后冰浴5min;

4.往步驟3的pcr管中依次加入下列組份

RNase 抑制劑（40u/ul）    0.5ul

10*AMV reaction buffer   2ul

DTT  (200mm)  1ul

逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）     1UL

5.輕輕混勻后，然后2000rpm離心20s

6. 現(xiàn)在42度保溫1hr ,然后70度保溫15min,

7.上述產(chǎn)物可立即進行下一步的pcr反應(yīng)或-20度保存。

AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶

LifeSci AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶
一、公司介紹
Life Sciences Advanced Technologies 成立于1975年，是世界上一家生產(chǎn)AMV反轉(zhuǎn)錄酶的廠商。LSAT的AMV反轉(zhuǎn)錄酶因為其高靈敏度和有競爭力的價格體系，已經(jīng)被許多世界有名的測序公司用于他們的反轉(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)品。
Life Sciences Advanced Technologies在分子診斷試劑和酶類的開發(fā)研究上處于世界*地位。
Life Sciences Advanced Technologies決心在兩個方面幫助人類疾病的診斷：提供應(yīng)用基因測序診斷慢性復雜疾病的反轉(zhuǎn)錄試劑盒里的AMV反轉(zhuǎn)錄酶和傳染病現(xiàn)場診斷的NASBA試劑盒。
 
二、產(chǎn)品推薦
1. RTHSA34
產(chǎn)品描述：
作為CDNA文庫構(gòu)建試劑盒的配套產(chǎn)品用于基因測序，濃度為35,000 U/ml。該款反轉(zhuǎn)錄酶已經(jīng)被位居世界前三的的一家測序公司用于他們的反轉(zhuǎn)錄試劑盒，可實現(xiàn)17.5 U / cDNA逆轉(zhuǎn)錄和低于1 ng的RNA序列轉(zhuǎn)錄。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
•僅需要0.5ul的酶對于每個cDNA文庫試劑盒，有效控制反應(yīng)體系，用于后續(xù)的擴增等
•每個cDNA文庫試劑盒只需要17.5U, 相對于其他使用200單位的逆轉(zhuǎn)錄酶，可以節(jié)省50%以上的成本。
• amv 效率是Invitrogen superscriptase (一款MMLV 反轉(zhuǎn)錄酶)的11倍，是NEB和Promega 同款AMV的4倍。
2.AMV 007
產(chǎn)品描述：
主要應(yīng)用于RT-PCR反應(yīng)的AMV反轉(zhuǎn)錄酶，已廣泛應(yīng)用于許多生物技術(shù)實驗室，濃度是20,000 U/ml。終端用戶使用2.5 U 就能完成一個RT-PCR反應(yīng)。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
•用2.5U就能完成一個反應(yīng)，有些中國用戶，將其20000單位/ml的產(chǎn)品稀釋到5000 U /ml，這樣客戶使用0.5 ul 就能完成一個RT-PCR反應(yīng)。
•一個RT - pcr反應(yīng)只需要2.5 U，相比NEB和Promega 的AMV RT，可以節(jié)省75%的成本。
3. BRT121
產(chǎn)品描述：
作為一種低無機磷酸鹽的反轉(zhuǎn)錄酶，適用于進行下游克隆過程中的CDNA合成，因為一般情況下較高的無機磷酸鹽濃度對磷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)有抑制作用。常用的可選濃度為5,000 Units/mL。